免费看日韩-免费看日韩欧美一级毛片-免费看午夜高清性色生活片-免费看毛片软件-性综合网-性做久久久久久久久25的美女

歡迎光臨上海懋康生物科技有限公司
主頁 > 技術文章 > 了解一下聚凝胺的使用步驟吧
技術文章
了解一下聚凝胺的使用步驟吧
  聚凝胺是一種多聚陽離子聚合物,常用于哺乳動物細胞的DNA轉染實驗以增強脂質體的轉染效率。Polybrene目前廣泛用于逆轉錄病毒介導的基因轉染,慢病毒介導的基因轉染,作用機理可能是通過中和細胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥從而促進吸附作用。Polybrene也是一種有名的抗肝素劑(肝素拮抗劑),常用來生產非特異性凝集的紅細胞。
 
  另外Polybrene也多用于蛋白測序,因為小劑量的Polybrene在自動測序分析可明顯改善多肽的降解現象。PVDF膜加入polybrene還能提高膜的親和性。
 
  實驗1:逆轉錄病毒感染(Retroviral Infection)
 
  (1)重組逆轉錄病毒原液的制備:取5ml生長培養基(5%血清)加入約含單層轉染逆轉錄包裝細胞的100mm培養盤內。孵育24h后,吸去培養液并用0.45μm濾器過濾。
 
  (2)待感染細胞的培養:100mm培養盤內加入10ml*培養基,細胞密度為5×105/盤。
 
  (3)病毒感染:細胞培養24h后,吸去*培養液。用含polybrene的2ml病毒上清 (或將病毒原液稀釋到2ml)感染細胞,polybrene的終濃度為5μg-10μg/ml。37℃孵育3-6h。
 
  (4)收集病毒顆粒:加入8ml*培養基。感染3天后,按照1:5的比例用選擇培養基裂解細胞。
 
  實驗2:轉染
 
  (1)*生長培養基培養細胞,培養細胞密度約50%;
 
  (2)孵育細胞18-24h后準備DNA-培養基- Polybrene混合液,按如下操作制備混合液:①添加*培養基(60mm培養皿2ml,100mm培養皿3ml),37℃預熱;②添加10ng~10µg質粒輕輕混勻;③加入Polybrene至終濃度為5μg-10μg/ml。輕輕混勻。以上每個成分需要按順序加入。
 
  (3)去除培養基,在細胞中加入DNA-培養基-Polybrene溶液,在37℃孵育細胞6-20h。細胞培養的前6h內約每1.5h輕柔混勻。
 
  (4)去除DNA-培養基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution(15%DMSO in 1X HBSS)輕輕蓋住細胞(60mm培養皿3ml,100mm培養皿4ml)。每次加入溶液時用手輕晃培養盤10s,使得液體均勻分布。然后37℃孵育細胞4min。
 
  (5)立即去除DMSO shock solution,用*生長培養基輕輕清洗細胞2次。對于60mm培養皿每次用5ml培養液清洗,100mm培養皿每次用10ml培養液清洗。
 
  (6)加入*培養基到細胞中;
 
  (7)穩定轉化:去除生長培養基,按照1:5的比例用選擇培養基裂解細胞。
 
  瞬時表達:去除生長培養基,加入新鮮的生長培養基。24-72h后收獲細胞。
  • © 2019 上海懋康生物科技有限公司 版權所有 技術支持:環保在線
  • 電 話:18616957973 傳 真:86-021-54736159 QQ號碼:1563822900 郵 箱:2971634497@qq.com 地 址:上海市閔行區虹梅南路2588號綠亮科創園1幢A棟321室
  • 備案號:滬ICP備16016464號-3 總訪問量:594576
在線客服 聯系方式

服務熱線

18616957973

主站蜘蛛池模板: 韩国在线精品福利视频在线观看 | 欧美成人性做爰 | 日韩欧美精品一区二区 | 久久久久久久久免费影院 | 国产人做人爱视频精品 | 久久国内精品自在自线软件 | 韩国激情啪啪 | 九九色综合 | 精品香蕉99久久久久网站 | 成年人网站免费 | 色偷偷女男人的天堂亚洲网 | 色视频在线观看免费 | 中文乱码字幕午夜无线观看 | 69xx欧美| 毛片手机在线 | 日韩理论在线 | a级毛片在线看日本 | 亚洲久久网 | 精品久久久中文字幕一区 | 美女网站视频黄色 | 爱啪网亚洲第一福利网站 | 国产一区二区三区不卡免费观看 | 亚洲欧美日本综合一区二区三区 | 国产亚洲精品午夜一区 | 欧美日韩亚洲国产 | 一级国产在线观看高清 | 欧美日韩精品在线视频 | 亚洲国产精品国产自在在线 | 欧美videofree性欧美另类 | 成人免费真人毛片视频 | 成人一区二区免费中文字幕 | 一级国产a级a毛片无卡 | 亚洲bt欧美bt国产bt | 337p粉嫩日本亚洲大胆艺术照 | 日韩特级片 | 欧美成人手机视频 | 久久久久久久久一次 | 被老外玩爽的中国美女视频 | 成人高清在线观看播放 | a亚洲 | 美女张开腿让男人桶爽动漫视频 |