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BL21系列感受態(tài)細(xì)胞常見問題(懋康生物整理)

BL21系列感受態(tài)細(xì)胞常見問題

 

以下是我司(懋康生物)整理的BL21系列感受態(tài)細(xì)胞常見問題,如有更多問題,歡迎在產(chǎn)品頁給我們留言或發(fā)郵件到maokang

 

Part 1、BL21/BL21(DE3)/ BL21 (DE3) pLysS感受態(tài)細(xì)胞

一、BL21/BL21(DE3)/BL21 (DE3) pLysS菌株和基因型

宿主菌Host Strain

基因型Genotype

BL21 strain

E. coli B F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm

BL21 (DE3) strain

E. coli B F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)

BL21 (DE3) pLysS strain      

E. coli B F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3) pLysS (CamR)   

基因型說明:

a)以上三個宿主菌都是大腸桿菌E. Coli. B/r菌株,不含lon蛋白酶,也缺乏外膜蛋白酶OmpT。這兩個關(guān)鍵蛋白酶的缺乏降低菌株內(nèi)表達外源蛋白的降解率。

b)DE3命名表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體(DE3 lysogen)(其上攜帶lacUV5啟動子調(diào)控的T7 RNA聚合酶基因),IPTG能誘導(dǎo)T7 RNA聚合酶的表達。

c)pLysS命名表明該菌株攜帶pLysS質(zhì)粒,含有表達T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能夠作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌,從而能夠降低目的基因的背景表達水平,但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達。pLysS質(zhì)粒賦予菌株氯霉素抗性(CamR),而且含有p1復(fù)制起始子,這一起始子使該菌株兼容于含ColE1或pMB1復(fù)制起始子的質(zhì)粒(比如pUC或pBR322來源的質(zhì)粒)。

 

二、BL21/BL21(DE3)/BL21 (DE3) pLysS菌株的應(yīng)用特征

BL21/BL21(DE3)/BL21 (DE3) pLysS三種宿主菌內(nèi)T7啟動子表達載體(比如pCAL, pET載體)呈現(xiàn)不同的蛋白表達水平。BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞是型菌株,滿足高水平蛋白表達且容易誘導(dǎo)。BL21 (DE3) pLysS感受態(tài)更嚴(yán)格控制毒性蛋白表達且具氯霉素抗性。

表達宿主

誘導(dǎo)方法

優(yōu)點

缺點

BL21

λ噬菌體CE6感染

zui嚴(yán)格控制背景表達(非誘導(dǎo)表達)

誘導(dǎo)不如DE3衍生菌有效;誘導(dǎo)(感染)過程更冗長

BL21 (DE3)

IPTG誘導(dǎo)lacUV5啟動子驅(qū)動的T7聚合酶

高水平表達

T7聚合酶泄露表達,引起潛在毒性蛋白的背景表達(非誘導(dǎo)表達)

BL21 (DE3) pLysS

IPTG誘導(dǎo)的T7聚合酶

容易誘導(dǎo)

與BL21 (DE3)相比,稍微抑制誘導(dǎo)表達

 

三、BL21/BL21(DE3)/BL21 (DE3) pLysS菌株的異源蛋白表達特征

表達宿主

異源蛋白(Heterologous protein)表達特征

BL21 strain

非毒性蛋白的高水平表達,不能用于T7啟動子驅(qū)動的蛋白表達(如pET) 

BL21 (DE3) strain

非毒性蛋白的高水平表達,用于T7啟動子驅(qū)動的蛋白表達(如pET)

BL21 (DE3) pLysS strain     

非毒性和毒性蛋白的高水平表達,背景表達低于BL21 (DE3),BL21

 

更多問題持續(xù)添加中。。。。。。

 

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貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

價格(元)  

MF2331-1000UL     

BL21 (DE3) Chemically Competent Cell 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞  

10×100μl    

280

MF2331-5000UL

BL21 (DE3) Chemically Competent Cell 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

50×100μl

1280

MF2332-1000UL

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BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

 

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