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想知道如何儲(chǔ)存酵母感受態(tài)細(xì)胞的方法就看看這些吧
  酵母,如釀酒酵母、裂殖酵母和畢赤酵母,通常用于生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究。酵母是易于培養(yǎng)的單細(xì)胞真核生物,他們的基因和蛋白質(zhì)與哺乳動(dòng)物具有很好的相似性,所以是好的生物模型。
 
  酵母細(xì)胞用于研究基因功能,蛋白質(zhì)相互作用,細(xì)胞通路等,也是大規(guī)模異源蛋白表達(dá)和小分子生產(chǎn)的宿主,在發(fā)酵,釀造和制藥行業(yè)等起著*的作用。涉及酵母的常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)有酵母雙/三雜交系統(tǒng),突變體篩選庫(kù)和同源重組,等等。
 
  關(guān)于冷凍保護(hù)劑
 
  甘油和二甲亞砜(DMSO)是常見(jiàn)的細(xì)胞可透過(guò)性冷凍保護(hù)劑,用于準(zhǔn)備感受態(tài)細(xì)胞。它們穿透細(xì)胞,防止冰晶的形成,冰晶可能會(huì)在凍結(jié)過(guò)程中導(dǎo)致膜破裂。甘油和DMSO也有一定的缺點(diǎn),他們可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞毒性,特別是在解凍過(guò)程中。
 
  非細(xì)胞透過(guò)性的試劑如蔗糖和海藻糖等也可用于替代物。山梨糖醇鈣也是一個(gè)好的冷凍保護(hù)劑,尤其適用于電穿孔制備感受態(tài)細(xì)胞。
 
  酵母感受態(tài)細(xì)胞的儲(chǔ)存
 
  每次轉(zhuǎn)化時(shí)使用新鮮的感受態(tài)細(xì)胞是明智的,因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存,轉(zhuǎn)化效率會(huì)降低,但這并不總是可行的。
 
  感受態(tài)細(xì)胞可以存儲(chǔ)在-80°C長(zhǎng)達(dá)一年,沒(méi)有轉(zhuǎn)化潛能的損失。然而,瞬間凍結(jié)在液氮或-80°C冰箱是不建議的。感受態(tài)細(xì)胞需要在冷凍保護(hù)劑中,像哺乳動(dòng)物細(xì)胞一樣緩慢地冷凍。
 
  1. 使用硬紙板或聚苯乙烯泡沫塑料盒等儲(chǔ)存。
 
  2. 用紙片等將盒子里的細(xì)胞管隔開(kāi),分成多個(gè)小格子。
 
  3. 復(fù)蘇過(guò)程中,在37°C解凍細(xì)胞,轉(zhuǎn)化前用豐富培養(yǎng)基清洗防凍劑。
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