Di-4-ANEPPS   膜電位熒光探針

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膜電位熒光探針，Di-4-ANEPPS，Di-8-ANEPPS，ANEP染料，F(xiàn)ast-response probe快速響應(yīng)探針，CAS：90134-00-2；

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產(chǎn)品描述：

ANEP (AminoNaphthylEthenylPyridinium)染料由Leslie Loew和同事開發(fā)，是zui靈敏且穩(wěn)定的快速響應(yīng)探針，能檢測亞毫秒級的膜電位變化。Di-4-ANEPPS（MX4038）和Di-8-ANEPPS（MX4039）在各種組織、細胞和模型膜系統(tǒng)中表現(xiàn)出相當一致的熒光強度變化率（10%熒光變化/100mV）。ANEP染料的電子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，從而，它們的熒光光譜對周圍的電場變化做出響應(yīng)。這些光學(xué)響應(yīng)足夠快來檢測興奮細胞（包括單個神經(jīng)元、心肌細胞和完整組織制備物）的瞬時電位變化。另外，ANEP染料的激發(fā)光譜呈現(xiàn)出電位依賴的遷移，從而使其能通過測定激發(fā)波長下的熒光比來定量膜電位。ANEP染料結(jié)構(gòu)上的差異使其適用于各種特定應(yīng)用（見附錄I和II）。

電位敏感ANEP染料的特征：

①兩性離子分子，在不同細胞和組織樣本中表現(xiàn)出zui穩(wěn)定的電位響應(yīng)。

②結(jié)合到磷脂膜上的最大激發(fā)和發(fā)射波長約為465/635nm【但光譜特征與環(huán)境密切關(guān)聯(lián)】

③非熒光直至結(jié)合到膜上

④溶于乙醇、DMSO和DMF【Di-2-ANEPEQ（MX4040）是水溶性的ANEP染料】

⑤快速響應(yīng)探針，適用于檢測亞毫秒的膜電位變化

Di-4-ANEPPS是各種細胞和組織類型中表現(xiàn)zui穩(wěn)定的電位探針。細胞膜電位的變化與染料激發(fā)熒光強度的變化相關(guān)。Di-4-ANEPPS能快速被細胞內(nèi)在化，因此，主要用于短期實驗。我司（懋康生物）也提供Di-8-ANEPPS（MX4039），親脂性更好且能更好的保留在質(zhì)膜外層。

基本特性：

1. CAS NO：90134-00-2

2. 化學(xué)名：Pyridinium, 4-(2-(6-(dibutylamino)-2-naphthalenyl)ethenyl)-1-(3-sulfopropyl)-, hydroxide, inner salt

3. 分子式：C28H36N2O3S

4. 分子量：480.66g/mol

5. 外觀：橙色至暗紅色固體

6. 純度：≥95%（HPLC）

7. 熒光：λex 496 nm, λem 705 nm in methanol【需注意：相較于在有機溶劑內(nèi)，苯乙烯染料與脂質(zhì)結(jié)合后通常發(fā)生很大的藍光遷移】

8. 溶解性：溶于DMSO、乙醇、DMF

9. 化學(xué)結(jié)構(gòu)式：

保存與運輸方法

保存：+4℃干燥避光保存，可置于-20℃長期干燥避光保存，2年有效。

運輸：室溫運輸。

注意事項

1）熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1.儲存液制備

將低溫保存的凍干粉置于室溫回溫至少20min，低速離心后，將其溶于有機溶劑比如乙醇、DMSO或DMF配制成1mg/ml（~2mM）的儲存液。將儲存液避光保存在+4℃。

2.ANEP染料的細胞加載

2.1批量加載

爬片培養(yǎng)的貼壁細胞一般通過將少量的染料儲存液（比如溶于DMSO）加入細胞培養(yǎng)基（終濃度為0.2-2μM）進行標記即可。更高的染料濃度（10-50μM）用于標記灌注的組織樣本。通常要加0.05% Pluronic®F-127（MS4301）在標記溶液內(nèi)，以提高染料的溶解（對于親脂性更高的ANEP染料比如Di-8-ANEPPS尤其不能省略）。低標記溫度（4-20℃）能抑制染料的內(nèi)在化。含探針的溶液孵育10-20min，細胞用不含染料的培養(yǎng)基清洗3次。

2.2逆行標記

特定的神經(jīng)元群細胞可通過定位壓力注射高濃度的染料溶液（10-20mg/ml，溶于DMSO或乙醇）進入神經(jīng)組織來實現(xiàn)標記。

3.熒光測定

一般通過記錄激發(fā)在450nm和510nm，發(fā)射在＞570nm處的熒光強度來進行熒光比率成像測定。當膜超極化，熒光強度比率（F450/F510）降低。電位響應(yīng)的校準可通過使用離子載體纈氨霉素（MS0049）和添加不同鉀離子濃度到細胞外培養(yǎng)基來調(diào)整多種膜電位來實現(xiàn)。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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